專利名稱：一種制備高包封率的利巴韋林脂質體口服乳的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抗病毒藥物新劑型制劑技術領域。提供了一種符合現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范》的高包封率的利巴韋林脂質體口服乳。
背景技術：
利巴韋林別名病毒唑、三氮唑核苷。為一種強的單磷酸次嘌呤核苷脫氫酶的抑制齊U，能抑制單磷酸次嘌呤核的活性，從而阻止病毒核酸的合成，有廣譜的抗病毒作用。在實驗室中對多種病毒有抑制作用。臨床上用于流感、甲型肝炎、口腔皰疹、帶狀皰疹等病毒性疾病。利巴韋林的產(chǎn)品及規(guī)格主要有:注射液，每支IOOmg(Iml);滴眼液，0.1% ;滴鼻液，0.5 %。有較強的致畸作用，故禁用于孕婦和有可能即將懷孕的婦女。大劑量應用本品(包括滴鼻在內)可致心臟損害。若呼吸道有疾患者，可引起呼吸困難、胸痛等不良反應，停藥后癥狀即可消失。脂質體是一種有磷脂組成的雙分子膜結構，靠這種結構方式可以很好的通過“膜融合”的方式將藥物傳送到細胞內。由于脂質體磷脂雙分子膜的流動性和多修飾特性，脂質體制藥技術受到了各界的廣泛認同和高度研究。脂質體技術用于天然產(chǎn)物藥物的傳送的研究也是被廣泛的重視。脂質體可以有較好的藥物傳送及靶向傳送功能，可以很大程度上降低藥物的毒副作用。專利技術《利巴韋林脂質體制劑(01128247.9 )提供了制備利巴韋林脂質體的基礎技術，由于前述專利均沒有能有效解決利巴韋林脂質體的包封率低，且產(chǎn)品口服的口味較差，不能滿足藥典的技術要求和產(chǎn)品的服用要求，無法上市，不能將脂質體產(chǎn)品的效益帶給 百姓。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是在利巴韋林傳統(tǒng)脂質體藥物傳送技術及其修飾技術研究了利巴韋林脂質體口服乳的配方的基礎上，研制了一種包封率高，符合藥典要求的能耐受121°C30分鐘熱力滅菌處理而穩(wěn)定的并具有廣譜pH穩(wěn)定性的利巴韋林脂質體口服乳。制備的利巴韋林脂質體口服乳在35-40°C孵放3小時保持分散體系的穩(wěn)定，滲漏率低，符合口服后胃、腸道PH較大變化的制劑要求，確保以脂質體形式被人體消化、吸收及轉運，能提高利巴韋林的藥理療效。該制備工藝成熟穩(wěn)定，且符合現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范》對最終滅菌制劑的相關要求。在《穩(wěn)定化的脂質體(200510092604.4)》、《利巴韋林脂質體制劑(01128247.9)》
發(fā)明專利的基礎上，開展了方法的研究。制備利巴韋林脂質體口服乳因為具有廣譜pH穩(wěn)定性，在稀釋與不稀釋的情況下，在PH2-8的緩沖液體系37°C 3小時的保溫培育，保持分散體系的穩(wěn)定。對產(chǎn)品中利巴韋林成分最終以脂質體形式被吸收并以磷脂雙分子膜的形式融合將藥物傳送到作用部位，確保了良好的藥理療效。以制備IOOOml利巴韋林脂質體口服乳計算，由緩沖液和乙醇溶液組成。一、乙醇溶液的組成(按制備IOOOml計算)
成分名稱用量備注
磷脂20-100克天然磷脂或修飾磷脂，飼料級以上
乙醇30-250ml 分分析純
維生素E 3-30克生化試劑 膽固醇1 -30克生化試劑
二、緩沖液的組成(按制備IOOOml計算)
成分名稱用量備注
利巴韋林 5-50克按《中國藥典》檢測合格
磷酸氫二鈉 2-30克分析純
磷酸二氫鈉 0.2-10克分析純
山梨醇5-250克生化試劑
β-環(huán)糊精 5-100克藥用原料
PEG3-80 克分子量 1000-400000
乳糖1-40克生化試劑
純化水適量純化水及以上規(guī)格的水
三、聚乙烯醇(PVA)溶液
成分名稱用量備注
聚乙烯醇 2-60克藥典標準
純化水500ml純化水及以上規(guī)格的水
四、符合現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范》要求的利巴韋林脂質體口服乳的制備過程。由于本技術產(chǎn)業(yè)化的需要，而脂質體技術最適合于產(chǎn)業(yè)化的制備技術就是注入法。為此，以注入法工藝為基礎闡述本制備方法。其他的脂質體制備工藝均可采用，但配方保持不變。I)對所有的用于生產(chǎn)制備利巴韋林脂質體口服乳的原輔材料按照對應的質量標準進行檢驗，均應符合質量標準。2)配制磷脂乙醇溶液。2.1分別稱量維生素E、膽固醇、磷脂于同一容器中。2.2量取處方量的95%乙醇或無水乙醇250ml，并倒入2.1的容器中。2.3在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在2.1容器內攪拌，攪拌轉速控制為5-100rpm,使其溶解成透明均一的溶液。2.4用0.22微米的除菌濾膜或濾器過濾2.3的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml，濾過液密封待用，應在8小時內使用完畢。3)配制利巴韋林的緩沖液。3.1依次稱取處方量的利巴韋林、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、山梨醇、環(huán)糊精、PEG-6000、乳糖于同一容器中。3.2量取純化水600ml，并倒入3.1所述的容器中，室溫或在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在3.1容器中5-200rpm攪拌使其充分溶解成為透明均一的溶液。3.3用0.22微米的除菌濾膜(濾器)過濾3.2的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml。濾過液密封待用，應在8小時內使用完畢。3.4制備聚乙烯醇溶液。取純化水，配制3%的聚乙烯醇溶液500ml。室溫或在20-80 0C水浴條件下攪拌使其溶解徹底的無色透明溶液。4)注入法制備利巴韋林脂質體口服乳。4.1將3.3制備的利巴韋林緩沖液倒入密封的脂質體制備容器中，40_80°C水浴條件下開啟攪拌，轉速控制為50-1000rpm，緩沖液應充分攪拌但不造成液體飛濺。4.2通過恒流泵或人工緩慢將磷脂乙醇溶液注入到攪拌著的緩沖液中。整個加注醇溶液的時間控制為30-150分鐘。磷脂乙醇溶液注入結束后，繼續(xù)攪拌20-50分鐘。4.3維持溫度不變，向4.2制備的利巴韋林脂質體口服乳中補充3.4的聚乙烯醇溶液至1000ml。補充完畢后繼續(xù)攪拌15-30分鐘。用薄膜過濾法作滅菌前脂質體口服乳細菌計數(shù)檢測，應小于100CFU/lml。4.4將4.3的利巴韋林脂質體口服乳用0.22微米的除菌過濾器(膜)進行除菌過濾，后于121°C溫度下，進行3 0分鐘濕熱滅菌處理。分散體系保持穩(wěn)定。4.5將4.4的脂質體溶液用分子截留量為1KD-50KD的超濾膜超濾，以除去沒有包封的藥物。超濾除去溶液200-400ml。剩余的600_800ml為脂質體口服液產(chǎn)品。4.6滅菌超濾后的利巴韋林脂質體口服乳用薄膜過濾法作細菌計數(shù)檢測，應無細菌生長。4.7工序4.6制備的利巴韋林脂質體口服乳用Sephdex_A50凝膠層析分離,測定其包封率大于80%。5)利巴韋林脂質體口服乳的包封率測試。工序4.6制備的利巴韋林脂質體口服乳用S印hdex_A50凝膠層析分離，測定器包封率大于80%。5.1利巴韋林脂質體口服乳的分離:用S印hdex A -50凝膠，將包封的利巴韋林與未包封利巴韋林分離開。5.2分別測定包封的利巴韋林與未包封的利巴韋林的量，計算包封率。包封率=包封的利巴韋林+ (包封的利巴韋林+未包封的利巴韋林)X 100%。6)利巴韋林脂質體口服乳廣譜pH穩(wěn)定性試驗。6.1分別準備pH為2、4、6、8、9的緩沖液10ml，用標記好的容器置于30_45°C的恒溫水浴箱中。6.2分別取4.5制備的利巴韋林脂質體口服乳0.lml、lml、5ml加入到每組pH的容器中，恒溫水浴培養(yǎng)3小時，原先分散均勻的體系應不出現(xiàn)絮狀物或其他不均一的情況。6.3利巴韋林脂質體口服乳的滲漏率測試。在pH為2、9的緩沖液(IOml)中加入利巴韋林脂質體口服乳(10ml)，在30-45°C的恒溫水浴箱中保溫培育，每I小時取樣I次，按5)的方法測定其包封率，包封率的減少量即為滲漏率。采用本技術方案的有益效果是:
本發(fā)明所制備的利巴韋林脂質體口服乳包封率符合藥典要求，能耐受121°C 30分鐘熱力滅菌處理，對低pH環(huán)境有高的耐受性，能耐受PH2-8的緩沖液體系37°C 3小時的保溫培育而保持分散體系的穩(wěn)定，滲漏率低。符合口服用藥的要求，能確保良好的利巴韋林藥理療效。
具體實施例方式實施例一:
注入法制備利巴韋林脂質體口服乳
I)對所有的用于生產(chǎn)制備利巴韋林脂質體口服乳的原輔材料按照對應的質量標準進行檢驗，均應符合質量標準。2)配制磷脂乙醇溶液。2.1分別稱量維生素E 10克、膽固醇5克、磷脂75克于同一容器中。2.2量取處方量的95%乙醇或無水乙醇250ml，并倒入2.1的容器中。2.3在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在2.1容器內攪拌，攪拌轉速控制為5-100rpm,使其溶解成透明均一的溶液。2.4用0.22微米的除菌濾膜(濾器)過濾2.3的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml。濾過液密封待用。3)配制利巴韋林的緩沖液。3.1依次稱取處方量的利巴韋林13克、磷酸氫二鈉18.6克、磷酸二氫鈉2.86克、山梨醇25克、β-環(huán)糊精25克、PEG-6000 15克、乳糖8克于同一容器中。

3.2量取純化水600ml，并倒入3.1容器中，室溫或在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在3.1容器中5-200rpm攪拌使其充分溶解成為透明均一的溶液。3.3用0.22微米的除菌濾膜(濾器)過濾3.2的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml。濾過液密封待用。3.4制備聚乙烯醇溶液。取純化水，配制3%的聚乙烯醇溶液500ml。室溫或在20-80 0C水浴條件下攪拌使其溶解徹底的無色透明溶液。4)注入法制備利巴韋林脂質體口服乳。4.1將3.3制備的緩沖液倒入密封的脂質體制備容器中，40-80°C水浴條件下開啟攪拌，轉速控制為50-1000rpm，緩沖液應充分攪拌但不造成液體飛濺。4.2通過恒流泵或人工緩慢將磷脂乙醇溶液注入到攪拌著的緩沖液中。整個加注醇溶液的時間控制為30-150分鐘。磷脂乙醇溶液注入結束后，繼續(xù)攪拌20-50分鐘。4.3維持溫度不變，向4.2制備的利巴韋林脂質體口服乳中補充3.4的聚乙烯醇溶液至1000ml。補充完畢后繼續(xù)攪拌15-30分鐘。用薄膜過濾法作滅菌前脂質體口服乳細菌計數(shù)檢測，應小于100CFU/lml。4.4將4.3的利巴韋林脂質體口服乳用0.22微米的除菌過濾器(膜)進行除菌過濾，后于121°C溫度下，進行30分鐘濕熱滅菌處理。分散體系保持穩(wěn)定。4.5將4.4的脂質體溶液用分子截留量為1KD-50KD的超濾膜超濾，以除去沒有包封的藥物。超濾除去溶液200-400ml。剩余的600_800ml為脂質體口服液產(chǎn)品。4.6滅菌超濾后的利巴韋林脂質體口服乳用薄膜過濾法作細菌計數(shù)檢測，應無細菌生長。實施例二:勻漿注入法制備利巴韋林脂質體口服乳
I)對所有的用于生產(chǎn)制備利巴韋林脂質體口服乳的原輔材料按照對應的質量標準進行檢驗，均應符合質量標準。2)配制磷脂乙醇溶液。2.1分別稱量維生素E 10克、膽固醇5克、磷脂75克于同一容器中。2.2量取處方量的95%乙醇或無水乙醇250ml，并倒入2.1的容器中。2.3在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在2.1容器內攪拌，攪拌轉速控制為5-100rpm,使其溶解成透明均一的溶液。2.4用0.22微米的除菌濾膜(濾器)過濾2.3的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml。濾過液密封待用。3)配制利巴韋林的緩沖液。3.1依次稱取處方量的利巴韋林23克、磷酸氫二鈉18.6克、磷酸二氫鈉2.86克、山梨醇25克、β-環(huán)糊精25克、PEG-6000 15克、乳糖8克于同一容器中。3.2量取純化 水600ml，并倒入3.1容器中，室溫或在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在3.1容器中5-200rpm攪拌使其充分溶解成為透明均一的溶液。3.3用0.22微米的除菌濾膜(濾器)過濾3.2的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng)，應小于10CFU/10ml。濾過液密封待用。3.4制備聚乙烯醇溶液。取純化水，配制3%的聚乙烯醇溶液500ml。室溫或在20-80 0C水浴條件下攪拌使其溶解徹底的無色透明溶液。4)注入法制備利巴韋林脂質體口服乳。4.1將3.3制備的緩沖液倒入可以控制溫度的高速勻漿設備的容器內，控制溫度為40-80°C，開啟勻漿機，控制頻率為ΙΟΟΟ-ΙΟΟΟΟΗζ，使緩沖液應充分攪勻但不造成液體飛濺。4.2通過恒流泵或人工緩慢將磷脂乙醇溶液注入到勻漿處理的緩沖液中。整個加注醇溶液的時間控制為30-150分鐘。磷脂乙醇溶液注入結束后，繼續(xù)勻漿20-50分鐘。4.3維持溫度不變，向4.2制備的利巴韋林脂質體口服乳中補充3.4的聚乙烯醇溶液至1000ml。補充完畢后繼續(xù)勻漿15-30分鐘。用薄膜過濾法作滅菌前脂質體口服乳細菌計數(shù)檢測，應小于100CFU/lml。4.4將4.3的利巴韋林脂質體口服乳用0.22微米的除菌過濾器(膜)進行除菌過濾，后于121°C溫度下，進行30分鐘濕熱滅菌處理。分散體系保持穩(wěn)定。4.5將4.4的脂質體溶液用分子截留量為1KD-50KD的超濾膜超濾，以除去沒有包封的藥物。超濾除去溶液200-400ml。剩余的600_800ml為脂質體口服液產(chǎn)品。4.6滅菌超濾后的利巴韋林脂質體口服乳用薄膜過濾法作細菌計數(shù)檢測，應無細菌生長。實施例三:
利巴韋林脂質體口服乳廣譜pH穩(wěn)定性試驗
I分別準備PH為2、4、6、8、9的緩沖液10ml，緩沖對不限。用標記好的容器置于30-45 °C的恒溫水浴箱中。2分別取實施例一4.4或實施例二4.4制備的利巴韋林脂質體口服乳0.1mlUml,5ml、IOml加入到每組pH的容器中，30_45°C恒溫水浴培養(yǎng)3小時，原先分散均勻的體系應不出現(xiàn)絮狀物或其他不均一的情況。實施例四:
利巴韋林脂質體口服乳的包封率、滲漏率測定 測試條件:Sephdex A -50凝膠柱、pH6.8磷酸鹽緩沖液
I利巴韋林脂質體口服乳的分離:用S印hdex A -50凝膠，將包封的利巴韋林與未包封利巴韋林分離開。2分別測定包封的利巴韋林與未包封的利巴韋林的量，計算包封率。包封率=包封的利巴韋林+ (包封的利巴韋林+未包封的利巴韋林)X 100%。3利巴韋林脂質體口服乳的滲漏率測試。在pH為2、9的緩沖液(IOml)中加入利巴韋林脂質體口服乳(10ml)，在30-45°C的恒溫水浴箱中保溫培育，每I小時取樣I次，測定其包封率，包封率的減少量即為滲漏率。4、測試結果。4.1利巴韋林脂質體口服乳包封率:81.1%。4.2利巴韋林脂質體口服乳滲漏率。培育溫度為37.6度
權利要求
1.一種制備高包封率的利巴韋林脂質體口服乳，其特征在于:所制備的口服乳中利巴韋林與磷脂的比例為0.5:1—5:1，其組成包括有維生素E、膽固醇、山梨醇、β-環(huán)糊精、聚乙二醇即PEG2000——PEG50000、乳糖、聚乙烯醇即PVA ； 以95%的乙醇或無水乙醇、磷酸鹽緩沖液作為溶劑制備所需的溶液，采用的高分子物質為聚乙烯醇即PVA和聚乙二醇即PEG2000——PEG50000 ； 使利巴韋林脂質體口服乳能耐受121°C 30分鐘熱力滅菌，保持分散體系的穩(wěn)定；能耐受PH2-8的緩沖液體系37°C 3小時的保溫培育，保持分散體系的穩(wěn)定，滲漏率低，符合口服后胃、腸道PH較大變化的制劑要求； 符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質量管理規(guī)范》要求的高包封率的利巴韋林脂質體口服乳的注入法制備過程為: 1)對所有的用于生產(chǎn)制備利巴韋林脂質體口服乳的原輔材料按照對應的質量標準進行檢驗，均應符合質量標準； 2)配制磷脂乙醇溶液: ` 2.1分別稱量維生素E 10克、膽固醇5克、磷脂75克于同一容器中； ` 2.2量取處方量的95%乙醇或無水乙醇250ml，并倒入2.1所述的容器中； ` 2.3在20-80°C水浴條件下，用攪拌槳在2.1所述的容器內攪拌，攪拌轉速控制為5-100rpm，使其溶解成透明均一的溶液； ` 2.4用0.22微米的除菌濾膜濾器過濾2.3的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng),應小于10CFU/10ml，濾過液密封待用，應在8小時內使用完畢；` 3)配制利巴韋林的緩沖液:`` ` 3.1依次稱取處方量的利巴韋林13克、磷酸氫二鈉18.6克、磷酸二氫鈉2.86克、山梨醇25克、β -環(huán)糊精25克、PEG-6000 25克、乳糖8克于同一容器中； `3.2量取純化水600ml，并倒入3.1的容器中，室溫或在20_80°C水浴條件下，用攪拌槳在3.1的容器中5-200rpm攪拌使其充分溶解成為透明均一的溶液； ` 3.3用0.22微米的除菌濾膜濾器過濾3.2的溶液，并對濾過液進行細菌計數(shù)培養(yǎng),應小于10CFU/10ml ;濾過液密封待用，應在8小時內使用完畢； ` 3.4制備聚乙烯醇溶液；取純化水，配制3%的聚乙烯醇溶液500ml ;室溫或在20_80°C水浴條件下攪拌使其溶解徹底的無色透明溶液； 4)注入法制備利巴韋林脂質體口服乳； `4.1將3.3制備的利巴韋林緩沖液倒入密封的脂質體制備容器中，40-80°C水浴條件下開啟攪拌，轉速控制為50-1000rpm，緩沖液應充分攪拌但不造成液體飛濺；` ` 4.2通過恒流泵或人工緩慢將利磷脂乙醇溶液注入到攪拌著的緩沖液中；整個加注醇溶液的時間控制為30-150分鐘，磷脂乙醇醇溶液注入結束后，繼續(xù)攪拌20-50分鐘；` `4.3維持溫度不變，向4.2制備的利巴韋林脂質體口服乳中補充3.4的聚乙烯醇溶液至1000ml，補充完畢后繼續(xù)攪拌15-30分鐘；用薄膜過濾法作滅菌前脂質體口服乳細菌計數(shù)檢測，應小于100CFU/lml ； ` 4.4將4.3的利巴韋林脂質體口服乳用0.22微米的除菌過濾器或膜進行除菌過濾，后于121°C溫度下，進行30分鐘濕熱滅菌處理；分散體系保持穩(wěn)定； `4.5將4.4的脂質體溶液用分子截留量為1KD-50KD的超濾膜超濾，以除去沒有包封的藥物，超濾除去溶液200-400ml ;剩余的600_800ml為脂質體口服液產(chǎn)品；.4.6滅菌超濾后的利巴韋林脂質體口服乳用薄膜過濾法作細菌計數(shù)檢測，應無細菌生長; .4.7工序4.6制備的利巴韋林脂質體口服乳用S印hdeX-A50凝膠層析分離，測定其包封 率大于80%。
全文摘要
一種制備高包封率的利巴韋林脂質體口服乳，所制備的口服乳中利巴韋林與磷脂的比例為0.51——51，其組成還包括有維生素E、膽固醇、山梨醇、β-環(huán)糊精、聚乙二醇(PEG2000——PEG50000)、乳糖、聚乙烯醇(PVA)。本發(fā)明所制備的利巴韋林脂質體口服乳包封率高，符合藥典要求。能耐受121℃30分鐘熱力滅菌處理，對低pH環(huán)境有高的耐受性，滲漏率低，符合口服后胃、腸道pH較大變化的制劑要求，確保以脂質體形式被人體消化、吸收及轉運，能確保利巴韋林的藥理療效。
文檔編號A61K9/127GK103169660SQ20131012943
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月15日 優(yōu)先權日2013年4月15日
發(fā)明者孟泉科, 石瑩瑩, 吉仙枝, 曹江華, 石正國 申請人:石正國, 孟泉科